nemoci-sympt/BAKTERIALNI-INFEKCE/stafylokok-aureus/mrsa/diagnostika-vlastnosti
Kultivace MRSA
Kultivační půdy
- Podle druhu klinického materiálu volba pevné kultivační půdy
- Většina materiálů do
- Pomnožovací půdy = thioglykolátový bujon [8]
Kultivace
- Většinou 24 h při 37°C
- Pevné kultivační půdy se kultivují 24–48 h
- Pokud pevné půdy zůstanou po kultivaci negativní
- Vyočkuje se ještě pomnožovací půda, je-li zakalená [8]
Agar MRSA select
- Více NaCl + oxacilin+cefoxitin+fungicidin
Diskové metody
- Malá inhibiční zóna u oxacilinu
- Za průkazné se považuje, když je malá zóna také u cefoxitinu
Kvalitativní latexová aglutinace
- Akutní vyšetření vzorku
- Určité nejasnosti v předchozím vyšetření
- Založena na detekci penicilin vázajícího proteinu PBP2a přítomného na buněčné membráně methicilin rezistentních kmenů S. aureus
- Reakce latexových částic senzibilizovaných monoklonálními protilátkami s extraktem PBP2a z buněčné membrány MRSA
- Po povaření bakteriální suspenze v alkalickém prostředí [8]
Kvantitativní PCR
Odběr vzroku
- Výtěrovkou / do zkumavky
- Do laboratoře do 2 hodin po odběru /do 24 h při dodržení správných zásad uchování jednotlivých druhů materiálu
- Vhodné použít transportní půdu
- Amiesovo transportní medium
- Anorganické soli
- Thioglikolát sodný
- 1% agaru
- Aktivní uhlí [8]
- Stuartova transportní půda bez aktivního uhlí [8]
Real-time PCR
Rychlá aglutinace latexu
- Detekuje bílkovinu PBP2a
Postup latexové aglutinace - průkaz kapsulárních antigenů
- Na destičku se kápne
- Kapka negativní kontroly
- Kapka latexového testu [8]
- Ke každé kapce se kličkou přidá vyšetřovaný kmen
- Promíchá se
- Pokud dojde k aglutinaci
- Jedná se o Staphylococcus aureus [8]
- Pokud ne
- Staphylococcus plasma koaguláza-negativní.
- Dojde i v negativní kontrole k aglutinaci
- Spontánní aglutinace a test nelze hodnotit [8]
Stanovení MIC
- Vyšetřovaný kmen se nasadí do 2 ml bujónku
- Kultivovat 2 hodiny při 37°C
- Naředit 20 ml fyziologického roztoku na sílu zákalu 0,5 – 1 stupeň McFarlanda (ředění asi 1:10)
- Pomocí automatické krokovací pipety naočkovat mikrotitrační destičku s vybranými druhy antibiotik o příslušných koncentracích
- Kultivuje se 24 hodin při teplotě 37°C v běžné atmosféře.
- Vzorky cílené na průkaz MRSA
- Vyhledávací testy i u materiálu, kde je Staphylococcus aureus jako běžná flóra [8]
MRSA Vyhledávací testy
- Test citlivosti k cefoxitinu
- MRSA-select (půda) [8]
Citlivost k cefoxitinu
- Stanovuje se difúzní diskovou metodou
- Použije se bílý (bez krvinek) Müeller-Hintonův agar
- Připraví se suspenze vyšetřovaného kmene o síle 0,5 stupně McFarlanda
- Půda se přelije suspenzí bakterií
- Položí se disk cefoxitinu a 24 h se kultivuje [8]
- Inhibiční zóna kolem disku cefoxitinu je 22mm a více
- Citlivý kmen Staphylococcus aureus [8]
- Inhibiční zóna v rozmezí 6-21mm
- Kmen MRSA [8]
MRSA-select
- Agarové medium pro izolaci a přímou identifikaci MRSA.
- Selektivita media
- Přítomnost vysoké koncentrace soli a směsi antibiotik a fungicidů
- Inhibuje většinu mikrobů s výjimkou MRSA [8]
- Identifikace = průkaz specifické aktivity Staphylococcus aureus
- Štěpení přítomného chromogenního substrátu
- Intenzivní růžové zbarvení kolonií MRSA [8]
- Výslekdy
- Růžové kolonie
- Methicilin rezistentní Staphylococcus aureus (MRSA) [8]
- Bílé kolonie
- Methicilin rezistentní plasma koaguláza negativní stafylokoky (MRCNS) [8]
- Nerostou
- Methicilin senzitivní stafylokoky (MSS) [8]